③实验中使用 RNase-free 的试剂和耗材。实验室可以选择使用1‰ DEPC 去浸泡枪头和 EP 管获得 RNase-free 耗材，但是由于 DEPC 是一种强烈的致癌物，已逐渐被实验室抛弃。近几年，商品化的 RNase-free 的试剂和耗材逐渐兴起，实验人员可以选择以保证实验的安全。

　　赛默飞将在6月15日19:00为大家带来一场精彩的直播。直播的内容涉及 RNA 提取、RNA 定量、RT-PCR 以及琼脂糖电泳的实操讲解，直播过程中更有专属礼品发放等你拿！大家可以扫描下方二维码进行观看。

　　RNA 的质量评价一般分为三个方面：RNA 的纯度、RNA 的浓度以及 RNA 的完整性。对于 RNA 的纯度和浓度可以使用 NanoDrop 分光光度计进行检测。纯的 RNA 一般情况下 OD260/OD280 的值为2。如果样品中如果含有蛋白质、苯酚等，A260/A280 比值会明显下降。OD260 反映的是溶液中核酸的浓度，但是当 RNA 浓度较低，或者 RNA 中存在 DNA 污染时，紫外分光光度法不能准确定量 RNA 的浓度。

　　RT-PCR 目前分为传统的两步法和一步法两种方法。传统的两步法包括：RNA 逆转录为 cDNA 和以 cDNA 为模板进行 PCR。而一步法中，RNA 的逆转录（RT）和 cDNA 的扩增在同一反应管中完成。相比单独的两步法，一步法工作流程更更简单，需要的移液步骤更少，这样可以更快地拿到结果并*大程度地减少污染。

　　下面是我们为大家分享的基因克隆实验中的一些实验环节小秘籍，让我们一起为科研助力，为研发加油！

　　目前，市场上提取 RNA 的产品很多。大致分为三个基本的类型：有机试剂产品、硅膜柱产品以及磁珠产品。需要注意，针对不同的样品需要选择合适的 RNA 提取试剂，例如：提取植物 RNA 时由于有些植物组织含有的酚类和糖类较多，因此需要特殊的 RNA 提取试剂。在这里，我们为大家推荐一款实验室普遍应用的 RNA 提取试剂：TRIzol Reagent。

　　以2021年1月7日 Nature 发表的一篇题为：Genomic basis of geographical adaptation to soil nitrogen in rice 的研究论文为例，文章通过熟练的运用基因定位与基因克隆技术鉴定到 OsTCP19 一个启动子区域的突变和氮素响应的水稻分蘖表型关联，进而阐明基因的等位基因和不同地理区域的土壤氮素含量相关。这也提示了我们基因定位与克隆技术对于科研发现的重要性。图片来源：Nature

　　④RNA 提取中尽量选择新鲜的实验样品，缩短采样和提取的间隔以避免 RNA 被内源 RNase 降解。不能及时处理的样品需要用液氮速冻并保存在-80℃冰箱中。当以上操作无法被满足时，推荐使用 RNAlater™ RNA Stabilization Solution 来保存样品。RNAlater™ RNA Stabilization Solution 能够迅速抑制内源RNase活性，保护 RNA 不被降解，使数据更可靠。并且 RNAlater™ RNA Stabilization Solution 适用于多种样本类型，并与多数 RNA 分离试剂兼容，满足不同实验需求；可以在不同温度下保存样品，方便运输/保存样本。图片来源：Thermo Fisher

　　大家是不是还有很多关于 RNA 提取以及 RT-PCR 的问题需要解决？

　　②提供专用的 RNA 提取操作环境，例如专用的操作实验台或者专用的安全柜。需要注意的是普通的酒精喷洒并不能有效去除操作环境中的 RNA 酶。在这里我们为大家推荐两款自己使用比较好的产品：RNaseZap™ RNase 去污溶液和 RNase Zap™ RNase 去污湿巾。这两款产品可以失活外源 RNase，创造更清洁的 RNA 实验环境，可用于实验台面、移液器、玻璃器皿等表面的处理，满足多种需求。图片来源：Thermo Fisher

　　原创 生物世界 生物世界近几年国内科研水平不断提高，国内科学家在 CNS 正刊上屡有斩获，我们*近对文献的梳理发现，聚焦在基因定位和克隆领域的文章占比较高。基因定位和克隆算是*经典的研究方向，每年仅就基因的发现与功能研究的文章就数不胜数，另外以基因克隆为技术支持的文章多次登上 Nature、Science、Cell 三大神刊。

　　TRIzol Reagent 是由赛默飞生产的一款完整、即用型试剂，可从多种生物样品中分离高质量的总 RNA。它拥有卓越的裂解能力，甚至可处理困难的样品类型。Phasemaker 管含有粘稠的聚合物，可将 TRIzol 试剂混合物的上层水相与下面的有机相分开并完全分离，从而大大简化吸取含有 RNA 上层水相这一步骤的操作。TRIzol Reagent 搭配 Phasemaker 管使用，操作更简单，RNA 产量可以提高多达30%。图片来源：Thermo Fisher

　　赛默飞推出“翱翔六月直播间”活动，为你准备了实验室的现场直播，亲自演示解答实验过程的环节~扫描下方二维码进入，超多干货的直播内容等你观看！

　　原标题：《老树发新芽，经典研究方向也能发Nature，带你了解研究背后的技术细节》

　　除了 SuperScript™ IV 逆转录酶，赛默飞提供的 E-Gel™ Power Snap 核酸电泳系统为检测提供了便利条件，使用干式预制预染 E-Gel 琼脂糖凝胶进行电泳，大大简化了电泳前准备工作。相机可直接接入电泳仪，无需外部电源或连接台式计算机，可实时查看和捕获样品图像。图片来源：Thermo Fisher

　　RNA 的完整性可以通过琼脂糖凝胶电泳进行评估。对于哺乳动物细胞提取的 RNA，未降解的总 RNA 电泳时在凝胶中会出现 28S、18S 和 5S rRNA 对应的条带，28S 的亮度为 18S 的两倍。如果有 DNA 污染则在 RNA 后会发现基因组 DNA 对应的条带。图片来源：Thermo Fisher

　　SuperScript™ IV 一步法 RT-PCR 系统，组合了性能*强的逆转录酶 SuperScript IV 和 PCR 酶 Platinum SuperFi，拥有*高的灵敏度和*快的反应时间；采用两步热启动法，不仅能获得*高的特异性，也能在室温配置体系，更加适合高通量实验。图片来源：Thermo Fisher

　　说到 RNA 提取，*主要的就是保证 RNA 的完整性，它是后续实验成功的关键。但是由于外界环境中无处不在的 RNA 酶以及 RNA 结构易降解的特殊性，导致 RNA 在提取中极易降解。那么如何防止在提取过程中 RNA 被降解呢？

　　Qubit 荧光计采用专门研制的荧光检测技术，该技术采用只有与 DNA、RNA 或蛋白质结合后才发出荧光的 Molecular Probes 染料。这些荧光染料只有与特异性的靶分子结合时，才能发出荧光信号，即使有游离核苷酸存在时亦是如此。由于 Qubit 技术只检测靶分子（而不是污染物）的浓度，因此这种特异性可以使您获得十分精确的结果。即便对于低浓度样品，Qubit 荧光定量亦具有出众的 DNA 和 RNA 定量特异性和灵敏度。

　　在基因克隆的整个实验流程里你遇到过哪些棘手的问题呢？想了解如何无降解地提取出完整的 RNA 吗？想知道如何通过 RT-PCR 扩增出目的基因吗？